廣西水產研究所從2006年底開始探索和實施羅非魚鏈球菌口服疫苗的研發,2010年6月在實驗室獲得突破,2010年7月至2011年4月底在廣東、海南及廣西南寧周邊共選擇了14個養殖戶進行疫苗田間安全性和有效性試驗,2011年5月開始在廣東、海南及廣西進行了疫苗生產應用示范。下面就該疫苗的研發和應用示范進行分析與小結。
A液主要是包含助溶劑和活化劑,主要作用是溶解和活化B液的有效成分;B液主要是免疫蛋白,主要作用是增強機體免疫抵抗力;需冷藏。
一、疫苗技術突破:
該研究在口服疫苗領域若干關鍵技術上取得了重大突破,包括:1、結合特異性粘膜免疫佐劑開發、納米微粒技術、免疫細胞靶向誘導及蛋白工程技術于一體形成的腸道免疫耐受屏障的突破技術;2、利用多種方法對病原進化變異與抗原免疫原性進行比較研究獲得穩定的可產生交叉免疫保護的疫苗菌株;3、獲得了一整套疫苗批量化生產工藝技術參數;4依據廣東、廣西、海南和福建四省氣候、養殖模式及不同規格羅非魚制定了針對性的疫苗免疫程序;5、建立了較全的羅非魚鏈球菌病原庫,共收集廣東、廣西、海南、福建、云南、重慶及美國、越南流行菌株142株,病原覆蓋了我國廣東、廣西、海南及福建四省羅非魚主要養殖區。
二、疫苗特點:
1、免疫成本可以接受,每尾免疫費用約1-1.5分錢/次,養殖全程只需4-6次投喂免疫;2、操作簡單可行,疫苗與飼料混合后投喂免疫,各種規模羅非魚均可操作;3、應激小,相對注射和浸泡免疫,免疫對健康羅非魚幾乎無應激;4、免疫保護率高,實驗室免疫保護率維持在75.0-86.7%,生產示范免疫保護率維持在80.6-95.0%(數據來源于免疫成功示范點)。5、安全環保無公害,疫苗主要成份為蛋白質、脂多糖和植物油等,未含任何對魚和人有害的物質。6、保存運輸方便,疫苗有效成份通過高度濃縮,3000尾劑量的疫苗體積只為10ml,于-20℃保存。
三、示范效果分析:
2011年分別在廣東、廣西及海南共選擇了43家養殖戶進行了疫苗應用示范,以下是廣東、廣西和海南三省免疫效果分析。
海南:文昌和瓊海的10個疫苗應用示范中,除1個養殖戶由于發病后應用疫苗造成免疫失敗,其余9個養殖戶在5月初至7月初均顯示了疫苗良好的免疫保護率,在周邊魚塘發生鏈球菌病出現死魚情況下,80%的免疫魚塘未發病,20%的免疫魚塘死魚數比未免疫魚塘減少在85%以上。按疫苗實驗室數據,第三次免疫與第四次免疫的間隔時間是30天,四次免疫保護期可達3個月,也就是9月底。但生產應用示范顯示(免疫最早的養殖戶),從第3次免疫后,每次疫苗免疫的保護期只有25-28天,也就是說疫苗的生產應用免疫次數會從原來的4次增加到6次,疫苗才能保護羅非魚度過鏈球菌發病期(5月初至9月底)。因此,我們將其余免疫示范點的第四次免疫時間從原來的間隔30天提前到第25天。通過調整,其余疫苗示范戶均保護到了6月底或7月初,即第四次免疫后的25-30天。當我們要求示范戶進行第5次免疫時,部分養殖戶認為這樣增強了免疫成本,同時與原來說的不一至,拒絕了加強免疫。因此,海南免疫示范點從7月初后不能得到加強免疫,隨著免疫保護期的結束,疫苗應用示范點也陸續發病。
廣東:在湛江(1個)、肇慶(13個)、惠州(4個)及清遠(1個)進行了疫苗應用示范。湛江雷州半島今年發病較早,從5月底就開始發病,疫苗示范戶選擇了26萬尾的大規格過冬魚在5月中開始進行了前3次基礎免疫,免保期可到7月初,養殖戶認為魚馬上要上市,因此沒有進行第4次免疫就賣魚了,因此該示范點達到了免疫目的。肇慶15個示范點,養殖面積約500畝,除2個點沒有嚴格按疫苗免疫程序使用外,其余13個示范點在8月10號前均顯示出疫苗良好的免疫效果,75%的免疫魚塘未發病,25%的免疫魚塘死魚數比未免疫魚塘減少在80%以上。肇慶今年7月初開始零星發病,月中旬后開始全面暴發,其中急性暴發比率較前兩年是大幅上升(30%以上),5-7天死亡率均在5成以上,高的達到8成。相對疫苗示范點周邊發病情況,疫苗的免疫效果在8月10號前非常明顯。但因疫苗的實驗室保護期與生產應用實際保護期不一至,共有70%的疫苗示范戶在8月10號后陸續發病,原因是其中40%的示范戶已來不及加強免疫(過的免疫保護期),30%的示范戶不愿意加強免疫。另外30%的示范戶通過加強免疫及綜合管理至今未發病(8月26號),其周邊全面發病。惠州華僑農場共4個示范點,面積約150畝。今年該區域7月初開始零星發病,7月中下旬為散發,8月1號后開始全面暴發,其中急性暴發比率較前兩年是大幅上升,5-7天死亡率均在4成以上,高的達到6-8成。其中2個示范點至今(8月26號)疫苗免疫效果非常顯著(周邊魚塘已發病1個半月),該2個養殖戶羅非魚養殖經驗非常豐富,注重綜合管理。另兩個養殖戶8月17號前均未出現發病,而其中一個示范點周邊從7月底后發病非常嚴重(四分場),由于前期疫苗顯示了良好的效果,該養殖戶投料一直不減(15號前),可能是疫苗產生的免疫力不足以抵抗連續20多天的高溫下該病的壓力,17號開始,該示范點開始發病。其中另一個示范點由于相互之間的不信任造成免疫后管理跟不上,17號開始發病。清遠示范點養殖戶去年9月底就應用注射型疫苗控制了其發病魚塘,今年其所有魚塘均進行了注射或口服疫苗免疫(約150畝),截至目前所有魚塘均未發病,該養殖戶養殖經驗非常豐富。
廣西:在合浦(5個)、北海(2個)、橫縣(1個)和南寧(3個)進行了疫苗應用示范。合浦5個點是做得最早的示范點,其中1個點因發病后使用疫苗造成免疫失敗,另1個免疫失敗點因發病后與養殖戶溝通比較困難,免疫失敗原因不清;其余3個點在8月10號前均顯示出良好的免疫效果,周圍魚塘均在暴發鏈球菌病,死亡率在4-8成,而其中1個示范點不發病,另兩個點死魚數比周圍魚塘減少90以上。北海、橫縣及南寧6個點共進行了約120萬尾羅非魚免疫應用示范,由于該6個點均是在6月中旬開始做的,各方面經驗掌握比較好, 6個點截至目前均未發病,北海和橫縣示范點周圍6月底已全面發病,南寧示范點周圍于7月底開始已全面發病。
四、免疫經驗總結:
1、前3次基礎免疫因在該養殖區域發病前15天完成;2、發病高峰期(7月下旬到9月中旬)免疫間隔期為20天1次;3、發病高峰期(7月下旬到9月中旬)要進行適當減料投喂,最好控制在正常水平的4-6成;4、重視調水和水體消毒(1-2次/1月)和養殖密度(1000-2000尾/畝);5、疫苗的免疫保護率在75-85%之間,如果周圍發病壓力不是很大的情況下,免疫魚塘很少發病;如果周圍發病壓力很大(連續15天以上的高溫,周圍均在暴發),部分免疫魚塘沒有免疫力的羅非魚發病,這時需及時采用抗生素進行控制,一般1個療程(4-6天),同時停止投料(喂藥除外),4-6天病情控制后可停用抗生素,投料調整到正常水平的2-6成。
五、體會:
1、養殖戶普遍對疫苗認識有些誤區:如用疫苗后就不能出現死魚或發病,因為疫苗均有其保護率,不可能100%的保護;如用疫苗就等于不能用抗生素,因為兩者各有優勢,疫苗的應用可以大量減少抗生素的使用量,在必要的時候可以輔用抗生素;如發病后才用疫苗,這樣更經濟等等,其實發病后是不能應用口服疫苗的。
2、疫苗實驗室數據和生產應用數據存在區別,該疫苗在保護期上區別較大,實驗室4次免疫后可保護3個月,而生產應用從3次基礎免疫后第次免疫保護期在25-28天。產生這一區別的原因可能是生產上因病原菌、水溫、水質、養殖密度及魚體質等因素形成的綜合發病壓力比實驗室單純的病原菌壓力大。
3、信任與理解。口服疫苗在整個疫苗研究領域(包括人用和畜禽用疫苗)是最難的,我們團隊研發該疫苗用了5年時間才有突破。2010年4-9月,我們在實驗室反復進行了4次重復試驗驗證疫苗的有效性;2010年10月-2011年2月在廣東、海南及廣西選擇了11家養殖戶進行了疫苗的生產應用安全試驗;2011年3月-5月在南寧選擇了3家養殖戶進行了疫苗生產應用效果檢測試驗(對免疫魚塘的羅非魚進行攻毒感染試驗)。各方面數據理想的情況下我們才進行疫苗生產應用示范,示范的目的是全面掌握疫苗生產應用各項數據和使用經驗,為疫苗的真正應用提供保障。
4、責任和信譽:面對連續3年的羅非魚鏈球菌大流行和大暴發,我們作為從事該項研究的人員理應站出來,深入生產將自己的研究與生產結合,促進研究能真正應用于生產為養殖戶服務。但在大災大難面前,我覺得養殖戶和研究人員應該在相互信任和理解的基礎上共同面對,在過程中出現的一些問題要采取正面積極的態度和方式進行處理。只有這樣,疫苗才能真正為生產服務。另外,疫苗的信譽是通過使用的過程,也就是實踐慢慢積累的,一開始它是沒有的。開始可能有30%的用戶使用成功了,對疫苗完全信任啦;另有30%的用戶可能在后期發病啦,對疫苗處于部分信任;另有40%的用戶可能應用失敗啦,對疫苗完全不信任了。我覺得這是一個新事務必經的過程,隨著各項生產應用經驗分析與總結,使用成功的用戶一定會越來越多,疫苗使用成功率也會不斷提高。北海、橫縣及南寧6個示范點(120萬尾)的成功就是很好的例子。因此,不管是疫苗的信譽,還是我們的信譽,只有在實踐中獲得和積累。如果因害怕失敗或經不起失敗而不去實踐,我想那所謂的信譽也只不過是虛的。
5、在水產養殖領域,免疫防病意思遠遠不夠。這種局面與養殖歷史有關,與目前市面上產品缺乏有關,與養殖生產免疫技術人員很少有關,與養殖戶整體素質有關,與政府投入及引導有關,等等。同時,與疫苗應用相配套技術、人員及設施等相對于人、畜禽都遠遠落后,甚至是空白,給疫苗的推廣示范帶來了很多困難。因此,要真正實現免疫預防在水產病害中發揮主力軍作用,需要政府、科研人員、社會及養殖戶共同努力。
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