蛭弧菌專家秦生巨：就EM菌相關問題與比嘉照夫教授商榷
（原中國醫學細菌保藏與管理中心弧菌噬菌體研究室主任 秦生巨）

      EM菌，這一名詞，對于水產人來說都不陌生，它在水產養殖業被廣泛應用。但是，EM菌到底是什么？它的功效又是什么？各種看法莫衷一是。它的發明者解讀：EM菌不是一種菌，而是一種技術，作用很大。

      有人質疑：每一種菌種都有它獨特的培養特性，如果說EM菌是以光合細菌、乳酸菌、酵母菌和放線菌為主的10個屬80余個微生物復合而成的一種微生（物）活菌制劑，如何讓這些具有相斥性的菌群混合到一起后產生功效？

      究竟EM菌該如何定義？請看中日兩大微生態制劑專家的專業解讀，究竟真理掌握在誰的手中呢?

      一、EM菌是什么菌？它的組成成分及比例？

      百度網上搜索結果：“EM菌（Effective Microorganisms,字面翻譯是：有效微生物[作者注]）是由大約80種微生物組成，EM菌由日本琉球大學的比嘉照夫教授1982年研究成功，于80年代投入市場。EM菌是以光合細菌、乳酸菌、酵母菌和放線菌為主的10個屬80余個微生物復合而成的一種微生（物）活菌制劑。”

      按照上述搜索結果得出的結論是：EM菌不是一個菌！EM菌就是以光合細菌、乳酸菌、酵母菌和放線菌為主的10個屬 80余個微生物混合培養物。

      什么叫微生物？微生物的定義是：它包括細菌、病毒、真菌以及一些小型的原生動物等在內的一大類生物群體。可分為細菌、病毒、真菌、放線菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體。

      既然EM菌是以光合細菌、乳酸菌、酵母菌和放線菌為主的10個屬 80余個微生物混合培養物。那么就有以下問題必須說明清楚不能有含糊或有歧義。

      （1）EM混合培養物中包含哪些細菌、病毒、真菌、放線菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體？它們各占比例是多少？它們各自的數量是多少？

      （2）既然EM是以光合細菌、乳酸菌、酵母菌和放線菌為主的10個屬 80余個微生物混合培養物。請列出在EM混合培養物中用了哪些菌種？菌名？菌株號？這些菌種在國際細菌學分類中地位？

      在這里我們假定EM微生物混合培養物中80余個微生物都是細菌和放線菌（不包含其他微生物，如果包含其他病毒、真菌、立克次體、支原體、衣原體微生物那就更加復雜），我們有必要進行以下討論。目前，微生物生態制劑已建立了國際通用的質量標準。其標準之一就是菌種標準，菌種標準是這樣規定的：

      （1）微生物生態制劑的生產菌種必須是正常微生物群的成員或其生長促進菌種；

      （2）對這些菌種必須進行嚴格的分類、鑒定；

      （3）這些菌種在自然生態環境中必須無毒、無害，原則上這些菌種是來源于自然生態環境，再回歸于自然生態環境。

      菌種是微生物生態制劑質量控制的源頭，是產量、質量和效果的重中之重。不是所有的有益細菌保藏物（菌種）都可以用于微生物生態制劑生產的，這里所指的有益的細菌保藏物（菌種），是由國家法定的菌種保藏管理機構經過嚴格的分類、鑒定，具有特定生態效應，生物學性狀穩定的特定的菌株。

      即使經過嚴格分類、鑒定的菌種，也必須每年鑒定一次，確認其原有的生物學性狀沒有發生改變。從事微生物工作的人都知道，微生物種群在人工培養基上反復傳代是會發生突變的（返祖）。發生突變的微生物種群就有可能恢復它致病性，恢復的致病性可能更加強烈，人類可能一時無法應對。

      也就是說，如果EM混合培養物中所用菌種不能給出菌名、菌株號，人們就不知EM混合培養物中所用的菌種是否是正常微生物群的成員或其生長促進菌種、不知EM混合培養物中所用的菌種是否是經過嚴格的分類、鑒定的。如果未經有關國家法定的菌種保藏管理機構經過嚴格的分類、鑒定，如何確定這些菌種的生物學性狀，如果不知道這些菌種的生物學性狀，那么如何知道這些菌種的生物學特性是否穩定？如何確認其原有的生物學性狀沒有發生改變？

      另一方面，如果EM混合培養物中所用菌種不能給出菌名、菌株號，人們就更不知EM混合培養物中所用的菌種是否是經過毒性試驗，而且是被證明無毒、無害的。國際通用的微生物生態制劑質量標準之三就是菌種的安全性，安全性標準是這樣規定的：對宿主或動物模型的原定位系統必須是無毒無害，安全有效。

      如果EM混合培養物中所用菌種這三點最基本的條件都不能滿足，就沒有依據說明EM混合培養物中所用菌種是可以用于微生物生態制劑生成用的菌種。

      二、生產工藝流程（制造及檢驗規程）

      所有的產品都有他特定的制造和檢驗規程，微生物生態制劑也不例外，而且微生物生態制劑的制造和檢驗規程更為嚴格。微生物生態制劑的制造和規程有三大必不可少的環節：即菌種，產品制造，半成品及成品檢驗。

      （1）菌種

      制造微生物生態制劑的菌種必須要說明菌種的來源、標準、形態、培養特性、血清學特性、生化反應、毒力、效力試驗、安全性、純粹檢查、菌種使用代次、菌種培養物保存條件及有效期。

      （2）產品制造

      依據百度網上搜索結果：“EM混合培養物是有光合菌群（好氧型和厭氧型）、乳酸菌群（厭氧型）、酵母菌群（兼性厭氧型）。采用日本菌種技術利用獨特發酵工藝把經過仔細篩選出來的好氣性（好氧）和嫌氣性（厭氧）有益微生物混合培養，形成功能強大的EM制劑。

      它是由世界著名應用微生物學家日本琉球大學比嘉照夫教授發明的，EM技術是目前世界上應用范圍最大的一項生物工程技術。和一般生物制劑相比，它具有結構復雜、性能穩定、功能齊全的優勢，表現出前所未有的高科技水平。”

      EM混合培養物是一種發酵培養物，也就是說含有80多個微生物通過發酵培養以后形成EM混合培養物。這無論是在理論上或在生產實際中是都不可能做到的。因為每個菌株它們都有各自的培養特性，如溫度、pH值（酸堿度）、營養源（培養基）、對氧氣的需要都不可能相同。請問如何用同一種發酵工藝完成產品的生產？

      我們先不討論各個菌株對溫度、pH值（酸堿度）、營養源（培養基）不同的培養特性，僅以對氧氣的需要為例。請問在同一個發酵罐體（環境）中如何制造一個有氧和無氧并存的環境？水火是如何相容的？如果在同一個發酵罐體中有氧環境和無氧環境不能同時存在，那么EM混合培養物中光合菌群（好氧型和厭氧型）、乳酸菌群（厭氧型）、酵母菌群（兼性厭氧型），是如何采用日本菌種技術，利用獨特發酵工藝把經過仔細篩選出來的好氣性（好氧）和嫌氣性（厭氧）有益微生物混合培養，形成功能強大的EM制劑的？這純屬無知之談！更別說EM混合培養物中80多個其它微生物其他發酵培養特性了。

      （3）半成品及成品檢驗

      國際通用的微生物生態制劑質量標準中明確規定：微生物生態制劑的有效成分主要是活菌，而活菌的數目是質量控制的重要指標之一。

      產品制造過程中必須對所發酵的產品中的活菌數進行檢驗檢測。請問是用什么方法對EM混合培養物中的80多個微生物活菌數進行檢驗檢測？如果沒有檢測怎么知道發酵物中的活菌數是達標的？如果檢測了請列出80多個微生物是用什么方法檢測的？需要多長時間檢測完成？

      如果沒有對EM混合培養物中的活菌數做檢測，那就無法判定產品是否合格，甚至都不能說是產品。即使有有效可靠的檢驗檢測方法，檢測也至少要用160天以上的時間才能檢測完成。因為稍有點微生物檢驗知識的人都知道，不可能用同一種方法檢測出同一個樣品中的兩個以上不同細菌（微生物）的數量。也就是說假定EM混合培養物中就是80個不同的菌株，那么要檢測其中一個菌的含量必須要用抑制劑抑制其他79個菌不能生長（何況不可能有某種抑制劑同時抑制79種菌，而且不抑制被檢菌株），否則你就無法判定出來的是哪個菌！如果不能判斷單菌含量，就無法判定產品是合格的。

      一個菌株檢測周期絕對不會低于24小時（如結核桿菌要7-30天才可形成菌落）。也就是說把每1個菌檢測1次，產品半成品檢驗時間絕對不可能少于80天。還不包括雜菌檢驗、毒理毒性測試試驗時間。80天檢驗結束了判定半成品合格了才可以進行成品生產。按檢驗規程規定還必須對成品進行活菌數檢測，這樣又需80天以上的時間。也就是說EM混合培養物的生產周期必須在200天以上！生產這樣的產品有意義嗎？什么樣的企業有能力和條件去生產這樣的產品？我敢斷言是沒有這樣的企業！日本有嗎？

      三、產品質量標準

      任何產品必須要有標準。因為標準是用來判定技術或成果好不好的根據，其中包含可以用來為某一范圍內的活動及其結果制定規則、導則或特性定義的技術規范或者其他精確準則。其目的是確保材料、產品、過程和服務能夠符合需要。EM混合培養物的標準何在？

      目前我國的水產養殖動物用微生物生態制劑，凡是農業部公布允許使用的品種和菌株，都已建立了國家標準菌株，或這些菌株已經過國家菌種保藏管理機構鑒定確認，都已制定了國家標準。使用未經國家允許使用的菌株生產水產養殖動物用微生物生態制劑屬違法生產。

      微生物生態制劑的質量標準包括菌種、物理性狀（產品外觀）、雜菌檢驗、雜菌病原性鑒定、活菌計數、作用與用途、用法與用量、注意事項、貯藏與保質期、規格。

      菌種。制造某一種微生物生態制劑所用的菌種必須注明，菌株代號以及該菌種的鑒定、保管和供應單位。

      必須對生產菌株的形態、培養特性、血清學特性 、生化反應 、毒力 、裂解試驗 、安全性 、純粹檢查 、菌種使用代次、菌種保存等是全面清楚的，否則是不可以使用的！不是說非致病菌（或稱有益菌）就可以用于微生物生態制劑生產的。

      除外菌種標準以外，由該菌種生產出來的產品也必須有物理性狀（產品外觀）、雜菌檢驗、雜菌病原性鑒定、活菌計數檢驗檢測的標準。

      還應該包括作用與用途、用法與用量、注意事項、貯藏與保質期、規格的標準。

      EM混合培養物是有80個微生物的混合培養物，這樣的混合培養物有什么方法進行雜菌檢驗、雜菌病原性鑒定、活菌計數的檢驗檢測？如果沒有雜菌檢驗標準那么雜菌數是如何控制的？如果沒有雜菌控制標準，那么產品雜菌就是任意的。如果檢出雜菌，不做病原性鑒定，怎么確認這些檢出的雜菌都是非致病性的？如果不能確定這些雜菌是非致病的，那么這些雜菌就有可能是致病菌。如果把這些含致病菌的EM混合培養物使用到環境中去豈不是等于人為投毒？

      微生物生態制劑的有效成分主要是活菌，而活菌的數目是質量控制的重要指標之一。EM混合培養物也不應該例外。沒有有效的方法能準確地檢出EM混合培養物中80個微生物分別各占數量是多少？那么活菌數的標準從何而來？如果活菌數都沒有具體的標準，那就是隨意的雜菌混合液。一個沒有標準的雜菌混合液，怎么還能說“EM混合培養物和一般生物制劑相比，它具有結構復雜、性能穩定、功能齊全的優勢，表現出前所未有的高科技水平”？

      四、批文

      中華人民共和國國務院《獸藥管理條例》明確指出 ：“獸藥，是指用于預防、治療、診斷動物疾病或者有目的地調節動物生理機能的物質（含藥物飼料添加劑），主要包括：血清制品、疫苗、診斷制品、微生態制品、中藥材、中成藥、化學藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品及外用殺蟲劑、消毒劑等。”也就是說微生態制劑是列入獸藥管理范疇的。

      中華人民共和國國務院《獸藥管理條例》第三十二條還規定：首次向中國出口的獸藥，由出口方駐中國境內的辦事機構或者其委托的中國境內代理機構向國務院獸醫行政管理部門申請注冊，并提交下列資料和物品：

      （一）生產企業所在國家（地區）獸藥管理部門批準生產、銷售的證明文件；

      （二）生產企業所在國家（地區）獸藥管理部門頒發的符合獸藥生產質量管理規范的證明文件；

      （三）獸藥的制造方法、生產工藝、質量標準、檢測方法、藥理和毒理試驗結果、臨床試驗報告、穩定性試驗報告及其他相關資料；用于食用動物的獸藥的休藥期、最高殘留限量標準、殘留檢測方法及其制定依據等資料；

      （四）獸藥的標簽和說明書樣本；

      （五）獸藥的樣品、對照品、標準品；

      （六）環境影響報告和污染防治措施；

      （七）涉及獸藥安全性的其他資料。

      申請向中國出口獸用生物制品的，還應當提供菌（毒、蟲）種、細胞等有關材料和資料。

      提交了這些完整的材料后，由國務院獸醫行政管理部門，設立的獸藥評審機構進行評審。經審查合格的，發給進口獸藥注冊證書，并發布該獸藥的質量標準。

      比嘉照夫教授是否向中國國務院獸醫行政管理部門提交了EM混合培養物的有關材料和資料，如果提供了，那么《進口獸藥注冊證書》或證書編號何在？

      EM混合培養物既然號稱是“由世界著名應用微生物學家日本琉球大學比嘉照夫教授發明的，EM技術是目前世界上應用范圍最大的一項生物工程技術。和一般生物制劑相比，它具有結構復雜、性能穩定、功能齊全的優勢，表現出前所未有的高科技水平。”那么就應該有完整的批文才是！

      如果EM混合培養物不能確定菌種是由國家法定的菌種保藏管理機構經過嚴格的分類、鑒定，如何確保生物學性狀穩定？

      如果沒有對EM混合培養物中所含的80多個微生物有有效的檢測方法，如果EM混合培養物沒有國家獸藥行政管理部門批準的標準，如果沒有獸藥相關批文或相關國家的批件，我們就有理由質疑：EM混合培養物是否是合格的微生物生態制劑？是否是在愚弄我國千千萬萬的用戶？作為一個專職負責任的研究人員應具備一定的科學素質，必須堅持以科學的態度看待問題、評價問題，而不能借用非科學或者偽科學的手段去愚弄社會。

日本微生態制劑專家星野忠義：EM菌是一個高度復合的微生物菌群形態

      星野忠義，日本微生態制劑專家，曾為日本EM研究機構的核心研究人員。2010年，他出任大連百安泰生物科技有限公司（下稱“百安泰”）技術顧問一職。6月中旬，他來到粵西，目的是什么？對于水產行業內褒貶不一的EM菌，在他眼中，到底是什么？功效原理在哪？對于微生態制劑的發展，他又持什么樣的態度？

      生態發酵料關注的是對池塘底質的修復

      《當代水產》：據了解，您此次到廣西，主要是想看百安泰生產的生態發酵料在實際養殖中的效果，目前這個產品的表現如何？

      星野忠義：發酵料是一種生態型飼料，從20世紀50年代開始研發，后來日本的環境污染及農藥公害等問題更是直接推動了其發展。目前發酵料中的微生物制劑不只是作為飼料的添加劑，促進腸內菌群的平衡，更有雙重作用，能對殘餌和糞便進行分解，修復養殖底質，減少因有害細菌滋生造成的發病，從而提高養殖的成功率。

      這次考察主要進行產品實際使用數據的收集，包括使用顯微鏡檢測浮游藻類的變化，以及底泥中菌群和底棲藻類的變化，通過這些數據的收集反饋，希望能在產品上不斷進步，讓養殖戶最終受益。

      因為蝦發病的病毒，很多都是后天因素所致，強應激下病毒很容易被異化出來，因此，通過環境的修復，能確確實實提高養殖戶收入，不光是對蝦，包括魚、文蛤和黃金蜆都是如此，特別是雙殼貝類，環境改善以后，對硅藻類的攝食會非常好。

      但提高養殖成功率是一個系統工程，不可能單靠一兩個產品就能取得全部效果，所以接下來會有系統性的產品研發，在改善環境方面也會有一些新的動作。

      《當代水產》：發酵料在實際養殖過程中效果如何？在完善研發方面，是否有新的思路或想法？

      星野忠義：拋開種苗問題不談，目前養殖最大的危機是環境惡化。環境惡化有諸多原因，當然這也跟我們自身過分追求速度和密度有關。除此之外，在飼料方面，中國南美白對蝦飼料中蛋白含量比較高，大概在42%左右。而在東南亞，例如馬來西亞、印尼等國家的南美白對蝦飼料中蛋白含量可能相對低一點，但也在35%~38%左右。這么高的蛋白含量，加之油脂含量也很高，投料下去，可想而知，殘餌和糞便對環境底質的負荷是非常重的。

      這次看了幾個養殖場，越發感到中國沿海養殖環境惡化的嚴重性，因為其實蝦對抗這種惡化環境的能力很弱，所以我們接下來考慮的是能否通過某種手段去改善這個問題，從而提高蝦的免疫力以對抗環境的應激。

      EM菌是一個高度復合的微生物菌群形態

      《當代水產》：您從事EM菌技術研究多年，那么EM菌究竟是什么，在細菌生物學是如何定義的？

      星野忠義：有很多中國的朋友跟我請教關于EM菌的菌群構成，在這里我跟大家重點講解一下，EM菌的主要菌群是酵母菌、乳酸菌、光合細菌，其它還有幾十種菌作為輔助菌。但值得注意的是酵母菌、乳酸菌和光合細菌都是很大的類群，像乳酸菌這一大類就有上百種細分種類，并不是所有種類的乳酸菌都能夠和其它菌群形成配合效應，相反，能夠形成配合效應的種類只占少部分。我們做的工作就是反復篩選出最具有配合力的菌群組合，并開發出多種菌群混合發酵的工藝，最終利用這種菌群協作的力量來發揮效果。

      自然界中的微生物存在著很多微妙的關系，這些關系是數億年自然進化的結果，不同微生物間協作、對抗、共生的關系是我這么多年的研究重點。EM菌是一個高度復合的微生物菌群形態，而不是用分類學可以簡單描述和定義的。

      《當代水產》：如何鑒別EM菌的質量？如何去理解EM菌的作用原理？

      星野忠義：不管任何領域，產品質量的鑒別都非常重要。其實好的EM菌并不難鑒定，但是首先一點要經常使用顯微鏡這個工具，EM菌中的很多微生物用顯微鏡是可以清楚看到的，比如短桿乳酸菌，在40倍的物鏡下就能清晰觀察到。優質的EM菌在出廠2個月后用顯微鏡觀察，菌群活力依舊很好，細胞完整，游動活躍。相反，如果細胞崩解、潰散，游動停滯，就是質量不達標的產品。另外一點就是通過氣味來鑒別，好的EM菌會散發出芳香族化合物的氣味，讓人感覺愉快，而質量一般的產品往往只是有淡淡的酸味。

      自然界中的微生物，包括人類腸道中的微生物，基本上益生菌、有害菌群、中間菌群的比例是2∶1∶7，這是一個平衡。打個比方，人之所以會拉肚子，就是因為腸道中菌群之間的平衡被打破了。EM菌技術并不是要改變這個平衡，恰恰相反，是要維持這個平衡。只是讓中間菌群偏向了有益菌方向，從而更好地抑制有害菌群的繁殖增長，維持各菌群之間的平衡，所以一個好的復合微生物（EM菌就是一個復合微生物），就應該具備這些特征。

      《當代水產》：下一步的研究您是否還會針對EM菌？或者新的研究方向？

      星野忠義：EM菌對我來說是很重要的研究課題，因為好的EM菌能夠直接改善環境，造福很多人。EM技術的研究是沒有盡頭的，而且這是一件富有樂趣和意義的事情，我會一直堅持作EM的研究。這幾年我們在實際的研究工作中又獲得了新的突破，尤其是在改善污染和修復土壤方面，這一點從用戶那里也得到了驗證，我希望把這些新的改進帶給中國的養殖戶，幫助大家改善養殖環境，得到持續的發展。

      中國微生態制劑應用前景廣闊

      《當代水產》：現在很多養殖戶在使用微生物制劑產品時，都是基于一種習慣去用，有沒有效果也不肯定，至于什么時候用，用量多少，很多時候是憑感覺，對此，您有什么好的建議？

      星野忠義：在一線做技術服務，很難在現場使用一些比較高級的儀器，其中一個簡單的辦法就是透過現象看本質，就像人生病一樣，按照中醫的理論，可以通過望、聞、問、切來判斷病情。由于服務一線的技術員對養殖池塘中底泥和水質的掌握很到位，所以技術員通過使用顯微鏡測試水質指標、藻相和菌相就可以判斷三種菌群的平衡是否被打破，這也是我們現場所能做到的，此外，積累經驗也是很重要的。

      其實去年也講到一個問題，微生物的推廣是一件很難也很辛苦的工作，因為微生物的作用效果不會很迅速就能體現出來，它不同于傳統的藥物，不是一得病立刻就能治好，而是需要一定時間使用才會體現出效果，所以希望大家要有耐心，用細致的觀察來體會這些細微的變化，只要能堅持不懈，就會獲得讓你意外的收獲。

      《當代水產》：您怎么看待中國水產微生態制劑產業的發展？與日本的微生態制劑的技術水平相比，有什么差異？您有什么看法？

      星野忠義：日本的EM菌技術從90年代就開始進入中國市場，并迅速得到了很多人的認可，但后來的市場就變得比較混亂，可能是因為當時對于這類產品的評價標準，沒有進行正確地指導，這才導致后來出現了一些魚龍混雜的產品。但是這個市場還是非常有前途的，在目前中國養殖環境比較惡化的情況下，大家對養殖不成功可能會有各種各樣的見解和看法，但環境確實是一個很重要的因素，而復合微生物恰恰就可以改善環境的問題。

      在微生物發酵方面，中國傳統的發酵工藝其實是非常優秀的，例如中國的酒、醋、醬油都是發酵的產物，擁有成熟的發酵工藝。日本的微生態制劑技術，主要是分類性的研究比較細，例如會針對益生菌的每一個種類都分別進行了深入的研究。雖然日本的發酵工藝和微生態制劑的研究比較先進，但是在水產領域的應用卻沒有中國那么廣，也沒有像中國這樣美好的前景，因為中國擁有全世界最大的水產養殖產業，其發展已經超過了日本。同時中國現在面臨的不再是吃飽肚子的問題，而是食品安全問題。而微生物可以通過改善環境，讓中國人吃到更好吃更安全的水產品，這也是我來中國的原因之一，希望這項技術能使更多的人受惠。

      對水產微生態制劑產業發展的看法，簡單講，可以用幾個關鍵詞加以概括：環境、自然、修復、健康。中國人口很多，所以環境壓力也非常大，可能大家對微生物制劑都有不同的看法，但是從我的角度來說，我認為一個好的微生物制劑應該是能適應環境，對環境有修復功能，同時還能促進養殖動物的健康，從而對人的健康和環境的都有所改善，這樣的產品才是將來的方向。