中國(guó)水產(chǎn)門戶網(wǎng)報(bào)道 一、引言
水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)是在對(duì)動(dòng)物病原體包括細(xì)菌、病毒等非常有效的生物殺滅劑和消毒劑的基礎(chǔ)上而研制的一種氧化性消毒劑。VirkonS(衛(wèi)康)由AntecDupont公司生產(chǎn),在美國(guó)和歐洲廣泛用于食品加工廠及動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施的消毒;它還作為一種病毒殺滅劑,廣泛用于生物安全程序以及動(dòng)物和人類流行病的控制。
動(dòng)物用VirkonS(衛(wèi)康)作為一種豬舍噴霧劑,可以通過(guò)減少動(dòng)物周圍空氣中感染性病毒粒子的濃度來(lái)降低病毒性疾病發(fā)生的幾率。最近,試驗(yàn)證明:水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)對(duì)魚類的病原體如傳染性鮭貧血病毒(ISAV)和傳染性胰腺壞死病毒(IPNV)也非常有效。
愛達(dá)荷州立大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖研究工作站的工作人員臨床觀察表明:在進(jìn)水中持續(xù)維持濃度為2ppm或4ppm的水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)對(duì)人工養(yǎng)殖的鮭科魚類群體沒(méi)有可觀察到的有害影響。而將水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)持續(xù)施入患急性傳染性胰腺壞死癥的魚類的養(yǎng)殖水體中時(shí),雖然臨床感染的個(gè)體仍在死亡,但魚群中發(fā)生新個(gè)體繼續(xù)感染的情況終止了,據(jù)此推測(cè)其原因是水體中感染性的病毒粒子被VirkonS(衛(wèi)康)清除了。
水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)與其說(shuō)是一種治療藥品,不如說(shuō)是一種傳統(tǒng)地用于水體、空氣或其它界面消毒的生物殺滅劑。因此,將之以低劑量、不致毒的濃度加入水體中,它就顯示出消毒的作用,使水體中的病毒數(shù)量降低到致病以下水平。從總體上的消毒劑性質(zhì)來(lái)看,似乎VirkonS(衛(wèi)康)也會(huì)對(duì)細(xì)菌以及水體中其它病原體如寄生性病原體、真菌孢子等也有殺滅作用。
就對(duì)水體進(jìn)行消毒從而控制精養(yǎng)魚池嚴(yán)重疾病的暴發(fā)而產(chǎn)生的潛在利益,以及降低農(nóng)場(chǎng)和排出水體的感染性水平來(lái)說(shuō),該產(chǎn)品在魚類健康、環(huán)境及其它福利等方面有著非常可觀的益處。然而,在此成為可能之前,必須證明:用這種方法控制水體中的微生物群,在為期一個(gè)月的時(shí)間內(nèi),該濃度水平的VirkonS(衛(wèi)康)對(duì)魚類沒(méi)有伴隨的慢性副作用;這一點(diǎn)是非常重要的。
因此,AntecDupont公司與愛達(dá)荷州立大學(xué)Hagerman魚類養(yǎng)殖試驗(yàn)站的R.W.Hardy教授訂立了一份研究合同,進(jìn)行了一項(xiàng)為期12周的毒性試驗(yàn)。該試驗(yàn)涉及將初孵的以及開口攝食的虹鱒(Oncorhynchusmykiss)魚苗飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)化的條件下,并保持水體中的VirkonS(衛(wèi)康)維持在連續(xù)劑量的能殺滅病毒的濃度水平。
在Inveresk國(guó)際公司進(jìn)行的研究表明VirkonS(衛(wèi)康)對(duì)大西洋鮭幼魚的96小時(shí)LD50值為25ppm。因此,在有效消毒的濃度水平下,即2ppm和4ppm時(shí),水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)被認(rèn)為幾乎是沒(méi)有毒性的。盡管如此,本研究還是詳細(xì)闡明了在上述濃度及6ppm和8ppm時(shí)的毒性作用。
二、材料和方法
1.魚類養(yǎng)殖
將從初孵期(0.08g)的虹鱒(O.mykiss)魚苗飼養(yǎng)在四種濃度水平的溶有VirkonS(衛(wèi)康)的水體中,直至其平均體重達(dá)到120g,其生長(zhǎng)、健康和存活狀況用不加VirkonS(衛(wèi)康)的飼養(yǎng)群體作對(duì)照。水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)由AntecDupont公司免費(fèi)提供給愛達(dá)荷州立大學(xué)。一共設(shè)置五個(gè)試驗(yàn)組:1)0ppm,2)2.0ppm,3)4.0ppm,4)6.0ppm,5)8.0ppm。
各濃度水平的實(shí)驗(yàn)組均設(shè)置三個(gè)飼養(yǎng)池。初孵魚苗每池放養(yǎng)500尾,體重到1g時(shí)減少到250尾,10g時(shí)每池100尾。飼養(yǎng)池用的是15個(gè)150L的玻璃纖維水槽。每池最初的水體流速為4L/分鐘,水溫為14.5℃;剛開始的流水不加VirkonS(衛(wèi)康);隨著生長(zhǎng),提高流速到8L/分鐘,最終流速為16L/分鐘。光周期用時(shí)鐘和日光燈來(lái)控制,白天14小時(shí),晚上10小時(shí)。飼養(yǎng)池在必要時(shí)進(jìn)行清洗,在稱重時(shí)進(jìn)行徹底的刷洗。每間隔21天對(duì)魚體進(jìn)行總體稱重。死亡的個(gè)體每天清除,并作記錄;即將死亡的個(gè)體也撈出,解剖,用福爾馬林緩沖液固定,以備作病理評(píng)估。
以商品虹鱒餌料(Nelson&Sons公司生產(chǎn))投喂,外觀飽食即可。開始時(shí)每天投喂十次,至本研究的末期時(shí),每天三次。投喂到外觀飽食是為了擴(kuò)大可能與試驗(yàn)處理相關(guān)的生長(zhǎng)抑制作用。記錄進(jìn)食量,并且每間隔21天對(duì)每個(gè)飼養(yǎng)池的飼料轉(zhuǎn)化率進(jìn)行計(jì)算。本研究第100天后結(jié)束,平均魚體重達(dá)到約120g。
2.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
所有的合適數(shù)據(jù)用方差分析(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性檢驗(yàn)。顯著性水平是P<0.05。將每個(gè)飼養(yǎng)池的平均值作為觀察分析的單位。
3.水處理方法
用蠕動(dòng)定量給藥泵向飼養(yǎng)池分別加入四種濃度水平的水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)。最初加入時(shí)稀釋50倍,通過(guò)給藥泵以合適的速度供給,最終要達(dá)到在進(jìn)水中的濃度分別是2ppm,4ppm,6ppm和8ppm。每種處理方式都有三個(gè)飼養(yǎng)池,并以三個(gè)不加VirkonS(衛(wèi)康)的飼養(yǎng)池作對(duì)照。
4.取樣
每間隔21天對(duì)魚體進(jìn)行稱重。例行地在第50天和第100天時(shí)取樣,進(jìn)行組織學(xué)分析;而平時(shí)只在發(fā)現(xiàn)有死亡個(gè)體的飼養(yǎng)池中取樣。例行取樣每次6尾,固定,對(duì)所有器官進(jìn)行檢查。
三、結(jié)果
結(jié)果顯示,在未開食的魚苗期,魚體完全可以耐受2ppm的VirkonS(衛(wèi)康)。而在4ppm、6ppm和8ppm飼養(yǎng)池中,雖然偶有魚苗死亡,但其死亡與VirkonS(衛(wèi)康)的劑量是無(wú)關(guān)的,因?yàn)檫@種情況也見于對(duì)照組中。然而,在開口攝食期,當(dāng)卵黃物質(zhì)90%被消耗時(shí),8ppm試驗(yàn)組的死魚損失迅速上升,并且在兩周內(nèi)這些魚苗全部死亡。而6ppm試驗(yàn)組有50%個(gè)體死亡。重復(fù)進(jìn)行這一特殊階段的試驗(yàn),每組仍是三個(gè)重復(fù)飼養(yǎng)池,結(jié)果相似。因此,在開口攝食期,水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)對(duì)虹鱒魚苗的LD50值約為6ppm。
一旦這一關(guān)鍵的大約14天的開口攝食期結(jié)束后,所有劑量組、所有重復(fù)飼養(yǎng)池的魚苗的臨床表現(xiàn)和死亡現(xiàn)象與對(duì)照組相比均沒(méi)有可觀察到的差別。2ppm和4ppm試驗(yàn)組的魚苗在整個(gè)后續(xù)的試驗(yàn)中的死亡率非常低。
任何經(jīng)VirkonS(衛(wèi)康)處理的飼養(yǎng)池的魚苗在初期的生長(zhǎng)速度均慢于對(duì)照組,但是到兩個(gè)月之末時(shí),其平均體重趕上了對(duì)照組。此后,所有試驗(yàn)組的飼養(yǎng)情況均優(yōu)于對(duì)照組,其中以4ppm試驗(yàn)組為最好。
除開口攝食期外,各試驗(yàn)組魚苗的組織學(xué)特征與對(duì)照組均是可比較的。在開口攝食期,2ppm試驗(yàn)組的魚苗與對(duì)照組沒(méi)有區(qū)別。而在4ppm、6ppm和8ppm試驗(yàn)組相應(yīng)增強(qiáng)地出現(xiàn)了嚴(yán)重的鰓表面上皮細(xì)胞的腫脹,這一現(xiàn)象在6ppm和8ppm試驗(yàn)組是顯著的。鰓組織還表現(xiàn)出特征性的粉紅色泌鹽上皮細(xì)胞的數(shù)量的增多,這可能是由VirkonS(衛(wèi)康)引起的循環(huán)反應(yīng)過(guò)程所導(dǎo)致的氯化鈉釋放的結(jié)果。
其它器官表現(xiàn)正常。因此可以假定,在這個(gè)特別的早期階段,高濃度水平的水產(chǎn)用VirkonS(衛(wèi)康)可導(dǎo)致對(duì)鰓的毒性作用;而8ppm的VirkonS(衛(wèi)康)對(duì)所有魚苗都是致命的。然而,這種對(duì)VirkonS(衛(wèi)康)的敏感是過(guò)渡性的,比如,4ppm試驗(yàn)組的所有魚苗以及6ppm試驗(yàn)組50%的魚苗都能安全度過(guò)這一時(shí)期(重復(fù)試驗(yàn)過(guò));而從此以后,4ppm試驗(yàn)組的生長(zhǎng)情況優(yōu)于包括對(duì)照組在內(nèi)的所有其它試驗(yàn)組,盡管試驗(yàn)組魚苗的鰓小瓣較之于對(duì)照組而略微腫脹。
4ppm試驗(yàn)組與對(duì)照組相比而生長(zhǎng)加快的原因尚不明確。開口攝食期以后,各試驗(yàn)組魚苗的死亡現(xiàn)象與對(duì)照組相比均沒(méi)有區(qū)別。任何重復(fù)飼養(yǎng)池之間的FCR(飼料轉(zhuǎn)化率)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異,所以,4ppm試驗(yàn)組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性的生長(zhǎng)加快也許是與其三個(gè)飼養(yǎng)池較高的飼料消耗量有關(guān),而不是飼料轉(zhuǎn)化效率增強(qiáng)的原因。
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