中國(guó)水產(chǎn)門戶網(wǎng)報(bào)道    各類維生素缺乏或比例失調(diào)，以及礦物元素不足和失衡會(huì)對(duì)魚類肝臟正常代謝造成不良影響，而草魚肝膽病的發(fā)生通常與飼料有關(guān)，甚至是首要因素

    草魚肝膽病的發(fā)生通常與飼料有關(guān)，甚至是首要因素。目前投喂的人工配合飼料的蛋白質(zhì)含量大多在24-30％之間，粗纖維含量一般小于12％。蛋白質(zhì)的大量攝入，促進(jìn)了草魚的快速生長(zhǎng)。雖然滿足了營(yíng)養(yǎng)需求，但草魚腹部呈膨大狀，體形粗而短，與食草草魚相比胸圍與體長(zhǎng)之比偏大，失去了早先固有的細(xì)長(zhǎng)條的優(yōu)美體態(tài)。另外部分蛋白質(zhì)在魚體內(nèi)被轉(zhuǎn)化成了脂肪，堆積在腸系及肝部周圍，加重了肝臟的負(fù)擔(dān)，直至形成脂肪肝；另一方面，人工配合飼料由于經(jīng)過(guò)高溫高壓蒸煮后，原料中所含的維生素等破壞損失較多，各類維生素缺乏或比例失調(diào)，以及礦物元素的不足和失衡同樣會(huì)對(duì)肝臟的正常代謝功能造成不良影響和損害。本試驗(yàn)擬在草魚飼料中補(bǔ)充一定量的以礦物元素為主要有效成分的魚類促長(zhǎng)保肝類產(chǎn)品—拜水安（BSA），判定其對(duì)草魚生長(zhǎng)和肝臟的保護(hù)效果。

    1、材料與方法

    1.1試驗(yàn)魚及試驗(yàn)設(shè)計(jì)
    試驗(yàn)用草魚（Ctenopharyngodon idellus）為當(dāng)年人工繁殖的同一批苗種，購(gòu)自重慶市榮昌縣梅石壩漁場(chǎng)，試驗(yàn)在西南大學(xué)水產(chǎn)系室內(nèi)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行。試驗(yàn)前暫養(yǎng)1周，試驗(yàn)采用的養(yǎng)殖設(shè)施為長(zhǎng)方形玻璃缸（總體積0.4m3，水體體積0.3m3）。養(yǎng)殖試驗(yàn)期間均連續(xù)充氧（除投餌期間外）。試驗(yàn)開始前停飼24 h，選擇體重相近(30.0±1.5)g，體格健壯的草魚魚種600尾，隨機(jī)分配于15個(gè)養(yǎng)殖缸，每缸40尾。試驗(yàn)分5個(gè)處理組，分別為陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、BS1組（BSA500g/t飼料）、BS2組（BSA1000g/t飼料）和BS3組（BSA2000g/t飼料）。每天早、中、晚投喂3次，至飽食，投喂結(jié)束后30min，吸出池內(nèi)殘餌及糞便。試驗(yàn)期間水溫25.0±1.0℃，pH7.5±0.5，溶氧≥5mg/L，氨氮<0.2mg/L，余氯<0.1mg/L，養(yǎng)殖試驗(yàn)共進(jìn)行56天。
試驗(yàn)前預(yù)先測(cè)定草魚96h的Cu2+半數(shù)致死濃度(LC50)，本試驗(yàn)條件下的96h LC50為(0.82±0.13)mg·L-1，根據(jù)LC50設(shè)計(jì)Cu2+含量梯度再進(jìn)行藥物性肝病造模試驗(yàn)，選擇肝病現(xiàn)象明顯、酶學(xué)指標(biāo)變化顯著的0.21mg·L-1(Cu2+含量)作為肝病模型的造模濃度。養(yǎng)殖第3周，將陽(yáng)性對(duì)照、BS1、BS2和BS3組的草魚浸浴于0.21mg·L-1 (Cu2+含量)的硫酸銅液體中4天，每天換液以保證溶液濃度。硫酸銅浸浴期間，飼料投喂暫停，間歇充氧，浸浴結(jié)束后，置于無(wú)硫酸銅的水體中飼養(yǎng)至第8周試驗(yàn)結(jié)束。

    1.2試驗(yàn)飼料
    配制飼料前，飼料原料均經(jīng)粉碎機(jī)粉碎并全部過(guò)60目篩，制成直徑為1.5mm左右的顆粒飼料，在30℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥24 h，置冰箱0℃保存。“拜水安（BSA）”產(chǎn)品由拜耳（四川）動(dòng)物保健有限公司提供。具體配方組成和營(yíng)養(yǎng)成分分析見表1。

    1.3 指標(biāo)測(cè)定
    8周養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，按如下要求或規(guī)程測(cè)定相應(yīng)的生長(zhǎng)、胃腸酶活性和肝酶指標(biāo)等。
    1.3.1 生長(zhǎng)速度 
    鮮重魚質(zhì)量變化、增重率和特定生長(zhǎng)率等表示生長(zhǎng)速度。
    1.3.2 飼料利用效率 
    以飼料系數(shù)和蛋白效率表示。
    1.3.3 全魚營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定 
    試驗(yàn)結(jié)束每處理組取9尾魚，進(jìn)行全魚營(yíng)養(yǎng)成分分析。魚體肌肉常規(guī)成分分析均用AOAC方法。其中水分采用105℃烘箱干燥恒重法，粗蛋白質(zhì)采用凱式定氮法（總氮×6.25），粗脂肪采用索氏抽提法(以乙醚為抽提液)，粗灰分采用馬福爐中灼燒法(550℃)。
    1.3.4 形體指標(biāo) 
    以肥滿度、內(nèi)臟指數(shù)（內(nèi)臟重與體重比）、肝胰指數(shù)（肝胰臟重與體重的比）等指標(biāo)對(duì)魚體形態(tài)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
    1.3.5 消化酶活性測(cè)定 
    脂肪酶活性測(cè)定：采用聚乙烯醇橄欖油乳化液水解法；蛋白酶活性測(cè)定：采用福林-酚試劑法。
    1.3.6 肝臟抗氧化活性測(cè)定 
    4℃條件下，肝臟樣品經(jīng)離心（600×g）后，取上清液用于各指標(biāo)測(cè)定。采用南京建成生物技術(shù)研究所的試劑盒測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、丙二醛（MDA）和溶菌酶（LSZ）的含量或活性。
   1.3.7 肝組織顯微病理學(xué)研究 
    在冰盤中剖殺試驗(yàn)草魚，取肝臟，Bouin`s液固定，石蠟包埋，切片5 μm，HE染色，光鏡觀察。

    1.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
    采用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，先對(duì)數(shù)據(jù)作單因素方差分析(ANOVA)，處理間若有顯著差異，再作Duncan’s多重比較，P<0.05表示差異顯著。

    2、試驗(yàn)結(jié)果

    2.1 對(duì)生產(chǎn)性能的影響
    草魚經(jīng)硫酸銅肝病造模之后，陽(yáng)性對(duì)照組的草魚增重率、特定生長(zhǎng)率、蛋白效率和成活率最低，顯著低于陰性對(duì)照組和BSA補(bǔ)充組（P<0.05），且隨著BSA添加量的增加，各指標(biāo)都有提高趨勢(shì)；但除BS3組的增重率比陰性對(duì)照顯著提高外（P<0.05），其余各BS組的增重率、特定生長(zhǎng)率、蛋白效率和成活率與陰性對(duì)照無(wú)顯著差異（P>0.05）。BS組與陰性對(duì)照組之間的草魚飼料系數(shù)無(wú)顯著差異（P>0.05），但均顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.05）（表2）。

    2.2 對(duì)全魚營(yíng)養(yǎng)成分和肝脂的影響
肝病造模及BSA對(duì)全魚粗脂肪和水分都沒(méi)有顯著影響，但BSA對(duì)全魚粗蛋白含量較陽(yáng)性對(duì)照組顯著提高（P<0.05）。肝病造模后的陽(yáng)性對(duì)照的肝脂含量顯著高于其余各組，而BSA的補(bǔ)充顯著降低了肝脂含量（P<0.05）（表3）。

    2.3 對(duì)草魚形體的影響
    陽(yáng)性對(duì)照的肥滿度顯著低于陰性對(duì)照和BS組（P<0.05），且隨著BSA的增加，肥滿度有提高趨勢(shì)，但除BS3組的肥滿度比陰性對(duì)照顯著提高外（P<0.05），其余各BS組的肥滿度與陰性對(duì)照無(wú)顯著差異（P>0.05）。陽(yáng)性對(duì)照的草魚肝體指數(shù)和內(nèi)臟指數(shù)顯著高于陰性對(duì)照和BS組（P<0.05），但BS組與陰性對(duì)照無(wú)顯著差異（P>0.05）（表4）。

    2.4 對(duì)草魚肝酶的影響
    試驗(yàn)以草魚肝臟超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）活性，及丙二醛（MDA）生成量來(lái)判定其抗氧化性能（表5）。肝病造模和BSA的補(bǔ)充對(duì)草魚肝CAT活性無(wú)顯著影響（P>0.05），而肝病造模導(dǎo)致陽(yáng)性對(duì)照草魚肝MDA生成量和SOD活性比陰性對(duì)照和BSA補(bǔ)充組顯著提高（P<0.05）；補(bǔ)充BSA后，草魚肝谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和溶菌酶（LSZ）活性比陽(yáng)性對(duì)照有顯著降低，比陰性對(duì)照略有提高。

    2.5 對(duì)草魚胃腸消化酶的影響
    陰性對(duì)照組的草魚前腸和中腸的蛋白酶活性與陽(yáng)性對(duì)照組和BS組間均無(wú)顯著差異（P>0.05），后腸和胃蛋白酶活性隨BSA的補(bǔ)充有明顯的上升趨勢(shì)，其中BS3組的后腸和胃蛋白酶活性顯著高于兩個(gè)對(duì)照組（P<0.05）（表6）。
    BSA的補(bǔ)充提高了草魚腸道脂肪酶的活性，BS3組的草魚前、中和后腸脂肪酶活性比對(duì)照組都有顯著提高（P<0.05），但各組間胃脂肪酶活性無(wú)顯著差異（P>0.05）（表7）。

    2.6 BSA對(duì)草魚肝臟的影響
    用硫酸銅造肝病模型后，陽(yáng)性對(duì)照組草魚肝組織糜爛，壞死，肝細(xì)胞崩解，細(xì)胞核消失（見后插彩頁(yè)圖2）；陰性對(duì)照組草魚肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)較清晰（見后插彩頁(yè)圖3）；同樣肝病造模后，在BS1組草魚肝細(xì)胞變得相對(duì)正常，但肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)發(fā)生變異，結(jié)構(gòu)不完整（見后插彩頁(yè)圖4）；BS2組草魚肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，但排列不夠整齊，肝細(xì)胞有輕微病變，部分扭曲（見后插彩頁(yè)圖5）；BS3組草魚肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，胰島結(jié)構(gòu)清晰完整，細(xì)胞排列整齊（見后插彩頁(yè)圖6）。

    3、小結(jié)

    3.1 BSA對(duì)草魚生產(chǎn)性能的影響
    試驗(yàn)第3周草魚進(jìn)行肝病造模后，與未肝病造模（陰性對(duì)照）相比，造模組（陽(yáng)性對(duì)照）的各項(xiàng)生長(zhǎng)性能指標(biāo)均顯著降低，飼料利用率下降。在肝病造模的情況下，草魚飼料中補(bǔ)充BSA（500-2000g/t飼料）后，其生長(zhǎng)性能各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著改善，甚至BS3組的草魚增重率、蛋白效率等較陰性對(duì)照（未造模）還有顯著提高。

    3.2 BSA對(duì)草魚全魚營(yíng)養(yǎng)成分和肝脂的影響
    肝病造模及飼料中補(bǔ)充BSA對(duì)草魚全魚粗脂肪和水分無(wú)顯著影響，但卻顯著降低了全魚蛋白的含量，并顯著增加了肝脂的含量。

    3.3 BSA對(duì)草魚形體的影響
    草魚進(jìn)行肝病造模后，其肝胰指數(shù)和內(nèi)臟指數(shù)均比陰性對(duì)照組顯著提高，且肥滿度降低；但補(bǔ)充BSA后，其肥滿度得到顯著提高，肝胰指數(shù)和內(nèi)臟指數(shù)都有顯著下降。

    3.4 BSA對(duì)草魚肝酶的影響
    CAT活性未受肝病造模和BSA補(bǔ)充的影響；而肝病造模導(dǎo)致陽(yáng)性對(duì)照組草魚肝MDA生成量和SOD活性比陰性對(duì)照組和BSA補(bǔ)充組顯著提高；補(bǔ)充BSA后，草魚肝GOT、GPT和LSZ活性比陽(yáng)性對(duì)照有顯著降低，比陰性對(duì)照略有提高。

    3.5 BSA對(duì)草魚胃腸消化酶的影響
肝病造模后，與陽(yáng)性對(duì)照組相比，BSA的補(bǔ)充顯著增加了草魚胃和后腸的蛋白酶活性，同時(shí)對(duì)腸道的脂肪酶活性也有顯著提高。

    3.6 BSA對(duì)草魚肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)影響
    組織切片結(jié)果表明，肝病造模引起草魚肝臟較嚴(yán)重的損傷，但飼料中補(bǔ)充BSA后，對(duì)肝病的恢復(fù)有顯著的作用。

    4、結(jié)論

    飼料中補(bǔ)充BSA（500-2000g/t飼料）后，可促進(jìn)草魚生長(zhǎng)性能和飼料效率的提高，并對(duì)肝臟有較明顯的保護(hù)作用。