中國(guó)水產(chǎn)門戶網(wǎng)報(bào)道魚油中富含具有重要生理功能的DHA（二十二碳六烯酸）、EPA（二十碳五烯酸），故從魚油中分離制備高度不飽和脂肪酸(PUFA)，引起國(guó)內(nèi)外廣泛重視。魚油的開發(fā)利用關(guān)鍵，是對(duì)魚油中DHA，EPA等PUFA進(jìn)行分離制備，以去除色素、膽固醇、飽和脂肪酸等非必需成分。

　　目前，從魚油中提取EPA、DHA的方法很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)。下面將主要介紹一下國(guó)內(nèi)外提取EPA、DHA的方法。

　　1、尿素包合法
　　尿素包合法是一種較常用的多價(jià)不飽和脂肪酸分離方法，其原理是尿素分子在結(jié)晶過程中與飽和脂肪酸或單不飽和脂肪酸形成較穩(wěn)定的晶體包合物析出，而多價(jià)不飽和脂肪酸由于雙鍵較多，碳鏈彎曲，具有一定的空間構(gòu)型，不易被尿素包合，紫蘇油中ALA，魚油中EPA與DHA都以甘油三酯的形式等幾率分布，空間位阻較大，難以直接包合，我們的做法是將其轉(zhuǎn)化為脂肪酸酯或脂肪酸的形式后再進(jìn)行包合。再采用過濾方法除去尿素包合物，就可得到較高純度的多價(jià)不飽和脂肪酸。

　　尿素包合法是采用乙醇作有機(jī)溶劑。乙酯化魚油、尿素、乙醇按1：2：6的投料比例進(jìn)行。

　　首先將200kg尿素加入到600kg乙醇溶劑當(dāng)中。待完全溶解后，緩慢加入100kg乙酯化魚油，控制溫度不超過75℃在攪拌狀態(tài)下包合30min：反應(yīng)結(jié)束后，靜止冷卻至室溫使尿素充分結(jié)晶，形成包合物。此時(shí)利用離心分離技術(shù)回收尿素，再將濾液進(jìn)行乙醇回收、酸洗和水洗等過程除去溶液中的乙醇和殘存的尿素，即可得到包合后的高不飽和脂肪酸乙酯濃縮液。(注：使用尿素試紙檢測(cè)濃縮液中尿素是否完全除凈)

　　對(duì)高不飽和脂肪酸乙酯濃縮液分別進(jìn)行定性定量檢測(cè)。經(jīng)氣相色譜分析，其中EPA和DHA含量可在60％以上；稱量濃縮液約在4kg左右，即收率可達(dá)到40％以上。

　　2、低溫冷凍法
　　根據(jù)脂肪酸混合物在過冷有機(jī)溶劑中溶解度的不同達(dá)到分離的目的。飽和脂肪酸在有機(jī)溶劑(常用丙酮)中的溶解度與碳鏈的長(zhǎng)度成反比；而同一不飽和度的脂肪釀，碳鏈越長(zhǎng)，溶解度越低；對(duì)同樣碳鏈數(shù)目的不飽和脂肪酸，隨雙鍵數(shù)的增加，溶解度增加。而且低溫條件下，這種溶解度的差異更加明顯，所以在低沮下將脂肪酸混合物镕于有機(jī)溶劑中，通過過濾，就可以除去其中大量的飽和脂肪酸和部分低不飽和脂肪釀，使EPA和DHA的總含量達(dá)到30％左右。用此種方法分離，需有極低溫的冷卻設(shè)備，成本比較高。

　　3、金屬鹽沉淀法
　　利用飽和脂肪酸、低不飽和脂肪酸以及EN和DHA的金屬鹽在某種有機(jī)溶劑中溶解度的不同進(jìn)行分離。飽和脂肪酸的金屬鹽比不飽和脂肪酸的金屬鹽在有機(jī)溶劑中的溶解度小，特別是在含5％水份的丙酮或乙醇中。其中鈉鹽、鋰鹽法應(yīng)用最多，濃縮后得到的EPA和DHA總含量可達(dá)到70％~75％，

　　4、皂化—尿素包合法
　　EPA、DHA的初步純化(皂化、酸化) 將溶有魚油量的15％Na0H的工業(yè)酒精溶液與魚油混合，同時(shí)加入少量硬脂酸，攪拌至肥皂大量出現(xiàn)，靜置1h壓濾，濾液冷藏過夜(也可以室溫放置過夜)，再次過濾除皂，濾液以HCL調(diào)PH＝3，冷藏(或室溫)放置過夜，過濾，分出少量飽和硬脂酸，濾液可減壓回收70％溶液，濃縮液以水洗至中性，干燥得富含EPA，DHA制劑。也可以繼續(xù)進(jìn)行尿素包合純化魚油多烯脂肪酸。

　　二次純化(尿素包合) 為了得到EPA、DHA含量更高的產(chǎn)品，進(jìn)行二次純化在上一步酸化過濾除去飽和硬脂酸之后所得到濾液中直接加入一定量的尿素，加熱至溶解（≤70℃)，之后自然冷卻至室溫．過濾除去尿素包合物，濾液也可以置于冷柜過夜．再次過濾除去結(jié)晶，所得濾液可先回收部分溶劑．水洗油層至中性。干燥，即得產(chǎn)品。水洗液可回收乙醇。對(duì)尿素包合物加水加熱溶解靜置分層，分出上層油水洗，干燥得副產(chǎn)品(主要是低不飽和酸和一定量的不飽和脂肪酸)，尿素回收。

　　5、魚油交酯化
　　在堿性催化劑存在時(shí)，通過用乙醇置換油脂中的甘油，制取脂肪酸乙酯．魚油乙酯化的目的在于將魚油中的高不飽和脂肪酸二十碳五烯酸(DA)和二十二碳六烯酸(DM)分離出來(lái)。

　　將100kg魚油加溫到72℃—76℃．在攪拌條件下加入40kg配制好的3.1N的NaOH—C2H5OH溶液進(jìn)行酯化，反應(yīng)30min左右，檢測(cè)pH值如已達(dá)到13—14，副反應(yīng)完全中止。此時(shí)加15.6kg配制好的1：1的C2H5OH—Hcl溶液進(jìn)行酸化反應(yīng)。控制溫度在70℃以下酸化20min左右，然后關(guān)閉攪拌，靜止沉陷20min后，放出下層甘油、水和鹽分，取上層乙酯比魚油轉(zhuǎn)入下一工序。該步可得乙酯化魚油110~120kg，經(jīng)氣相色譜分析，DAH+EPA純度僅為30％左右。

　　6、真空蒸餾法
　　原理 尿素包合法濃縮的魚油，EPA和DHA含量最高只能達(dá)到70％左右(實(shí)驗(yàn)室可達(dá)70％以上)，但是為了達(dá)到70％以上或更高的純度，并起到脫色目的，則要進(jìn)行高真空分子蒸餾工藝。其原理就是根據(jù)不同物質(zhì)或同一物質(zhì)中不同組分的沸點(diǎn)不同，而在不同溫度上，即不同沸點(diǎn)或沸程下由低到高截取各階段的不同餾分，從而達(dá)到高精度的分離提純目的。

　　其次，由于邊油中的色素分子要相對(duì)較大，在蒸餾時(shí)隨溫度的升高、物料的減少而逐漸沉積凝聚在容器底部或壁上，從而使被蒸溶出來(lái)物質(zhì)顏色較淺，達(dá)到脫色目的。

　　操作方法 為達(dá)到更高的質(zhì)量要求，將尿素包含所得的高不飽和脂肪酸乙酯濃縮液．在真空度低于100Pa的工藝條件下進(jìn)行分子蒸餾。分別在180℃~190℃、190℃~200℃和200℃~215℃三個(gè)溫度段上截取輕餾分、中間餾分和重組分。這樣，就可以使重組分中的EPA和DHA純度達(dá)到70％乃至更高。

　　7、綜合法
　　綜合法是鹽析法、低溫冷凍法、尿素包合法等方法的綜合應(yīng)用。

　　總脂肪酸(FA)的提取采用鹽析法。具體工藝為：取1/4魚油量KOH，溶于95％乙醇中，制成2％的乙醇液于燒瓶?jī)?nèi)，加入魚油，在氮?dú)饬飨录訜峄亓?0~90min，使完全皂化，皂化程度檢查用硅膠G薄層層析法，以甘油三酯斑點(diǎn)消失判皂化完全。皂化液于室溫靜置4~12h，減壓抽濾，除去飽和脂肪酸鉀鹽結(jié)晶。濾液于一定溫度下靜置24h，再抽濾，向?yàn)V液加魚油量3~5倍量石油醚提取不皂化物，振搖、靜置分層，除去石油醚層。下層液以4mo1．L-1鹽酸或30％硫酸調(diào)PH至l~2，攪拌，靜置后，收集上層液，得粗總脂肪酸，脫水后減壓蒸餾(或通N2蒸餾)乙醇后，得總脂肪酸。

　　多烯脂肪酸(PUFA)的制取用尿素包合法，包合工藝為：以總脂肪酸重2~5倍量尿素，加入總脂肪酸(g)12倍量無(wú)水乙醇(m1)中，加熱使溶解，在不斷攪拌下加入總脂肪酸(如用尿素包合，總脂肪酸可不作脫乙醇處理)，加熱(60~65℃)至溶液澄清，室溫?cái)嚢?h進(jìn)行一次尿素包合，靜置24h，抽濾，除去尿素包合物結(jié)晶。另取3倍量乙醇加半量尿素，攪拌(必要時(shí)加熱)使镕解，與濾液合并。室溫?cái)嚢柽M(jìn)行二次包合，靜置6h，于一定溫度放置24h．抽濾，濾液每100mL加水300mL、2mo1•L-1鹽酸70mL．?dāng)嚢?h，靜置后收集上層油樣液，水洗數(shù)次后，以無(wú)水硫酸鈉干燥，得多烯脂肪酸。

　　8、超臨界萃取法
　　所謂超臨界萃取就是用高溫、高壓下的CO2流體從原料中溶解要想分離的成品通過改變溫度和壓力，分離出目的物質(zhì)。超臨界CO2萃取法是經(jīng)典萃取工藝的延伸和擴(kuò)展，與傳統(tǒng)的分離方法相比，有如下一些特點(diǎn)：

　　a)超臨界CO2萃取結(jié)合了蒸餾和萃取的特點(diǎn)，既可按揮發(fā)度的差異也可按分子間親合力的不同進(jìn)行混合物的分離；

　　b) 由于CO2的臨界溫度為31.1℃，臨界壓力7.374MPa，所以操作溫度較低，因而操作條件比較溫和，而且CO2無(wú)毒、安全且本身是惰性氣體，能限制高碳脂肪酸的自動(dòng)氧化、分解和聚合；

　　c)操作簡(jiǎn)單，萃取、分離一步到位，能耗低；

　　d)抽提器壓力很高，需要養(yǎng)護(hù)高壓泵和回收設(shè)備，這是超臨界CO2萃取的缺點(diǎn)。

　　超臨界CO2萃取法能較好地按碳原子數(shù)為序分離魚脂酸酯，卻難于分離碳原子數(shù)相同．雙鍵數(shù)不同的魚脂酸酯。若將超臨界CO2萃取法和其它的方法相結(jié)合，有希望提高EPA和DHA的純度。例如超臨界CO2萃取法和尿素包合法相結(jié)合，超臨界CO2萃取法和精餾相結(jié)合等，EPA、DHA的含量可分別達(dá)到90％以上。

　　9、其他分離純化方法

　　a).柱層析法：采用AgNO3的硅膠柱層析，所得EPA及DHA的含量在90％以上，且可獲得一定量的產(chǎn)品，比較經(jīng)濟(jì)實(shí)用。但也存在缺點(diǎn)，如：洗脫劑安全性差、Ag+易污染制品、AgNO3的硅膠柱不能夠再生、以及不適宜大規(guī)模操作等。

　　b).薄層層析法：采用4％AgNO3硅膠板，能得到77％的EPA和84％的DHA，但不能得到大量的產(chǎn)品，且重現(xiàn)性不好。

　　c).氣相色譜法：日本目前已有專門用于脂肪酸氣相色譜分離的大型玻璃柱，將高不飽和脂肪酸的甲酯作為試樣，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)，收集到高純度的EPA和DHA。

　　d).高效液相色譜法：通過逆相分配法進(jìn)行分離。原理是根據(jù)EPA及DHA以及其它脂肪酸在流動(dòng)相和固定相中的分配系數(shù)不同。所用的擔(dān)體有PAK-500/C18柱、 Permaphace ODS擔(dān)體等。洗脫液有乙醇、四氫映喃等。目前日本已可以用大型的制備柱來(lái)進(jìn)行生產(chǎn)制備高純EPA和DHA。

　　目前從魚油中分離制備PUPA的方法有10余種，但工業(yè)上大規(guī)模制備，主要采用低溫法與尿素包合法。主要是由于其他方法受到產(chǎn)品純度、生廠成本、產(chǎn)品安全性等因素的限制。


                                   南方漁網(wǎng)編輯：黃倩