摘要：隨著蝦的急性肝胰腺壞死病（AHPND）在亞洲蔓延，在蝦的肝胰腺和腸道開始流行蠕蟲狀像簇蟲一樣的東西。這種情況很大的概率會出現(xiàn)白色的糞便，這種現(xiàn)象稱為白色糞便綜合征（WFS）。取肝胰腺的新鮮組織染色涂片，用光學(xué)顯微鏡觀察得知，蠕蟲狀體近乎透明，其直徑與有蠕蟲狀體蝦的肝胰腺小管相匹配。盡管有蠕蟲狀的物質(zhì)出現(xiàn)，但結(jié)果顯示它沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)。在高倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)（LM 與 40-100x 目標(biāo)），它是由一層膜包圍的加厚的跨折疊膜的復(fù)合物。透射電子顯微鏡（TEM）發(fā)現(xiàn)該蠕蟲狀體膜孔的非層膜與質(zhì)膜和已知簇蟲、其他原生動物或后生動物的外層都不相同。亞細(xì)胞的細(xì)胞器例如線粒體，細(xì)胞核，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體是不存在的。內(nèi)部膜有一個管狀的子結(jié)構(gòu)，偶爾會包含整個 B 細(xì)胞，B 細(xì)胞從肝胰腺小管上皮細(xì)胞脫落。這些內(nèi)部膜顯示，微絨毛從肝胰腺小管上皮細(xì)胞脫落，然后在管腔內(nèi)聚集。微絨毛脫落時，原始細(xì)胞裂解了。與此相反，B 細(xì)胞保持完整或分別獨(dú)立地和整體的從細(xì)管上皮脫落。在光鏡下，當(dāng)脫落的微絨毛聚合包圍 B 細(xì)胞就可能被誤解為囊腫狀結(jié)構(gòu)，使它看起來像簇蟲。 ATM（蠕蟲狀體）的原因目前還不清楚，但微絨毛脫落和隨后的細(xì)胞的裂解表明其形成是一種病理過程。如果足夠嚴(yán)重，他們可能會延緩蝦的生長，可能會使蝦易患條件致病菌病。因而， ATM（蠕蟲狀體）的原因和它與急性肝胰腺壞死病之間的關(guān)系需要繼續(xù)研究確定。 

    引言： 
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯示，發(fā)現(xiàn)肝胰腺上的微絨毛脫落，之后聚合成蠕蟲狀體，它表面看起來像簇蟲這個現(xiàn)象，斷斷續(xù)續(xù)花了 6 年時間。剛開始這個研究獨(dú)立的，之后在對各種已知蝦病原體從病毒、細(xì)菌、真菌和寄生蟲的項(xiàng)目研究時，順便也研究觀察 ATM。但直到最近才被單獨(dú)研究 ATM 的把它們之間聯(lián)系起來，使它們成為鏈接成一個連貫的整體。為了找出它們之間的聯(lián)系，我們把它作為主要工作進(jìn)行了密集的調(diào)研。 

    自 2009 年以來，特別是 2011 年以來，進(jìn)行了數(shù)以百計(jì)的蝦標(biāo)本研究，試圖確定急性肝胰腺壞死病（AHPND）與它的關(guān)系。最近的，嚴(yán)重的蝦流感大流行對亞洲蝦的養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的損失。AHPND 暴發(fā)始于培育南美白對蝦、斑節(jié)對蝦和中國對蝦。南美白對蝦的 AHPND 在2009 年的中國暴發(fā)后，逐漸蔓延到越南（2010 年），馬來西亞（2011 年）和泰國（2012），盡管該疾病在當(dāng)時不知道具體原因。事實(shí)上，它直到 2011 才首次被定義為 AHPND（稱為急性肝胰腺壞死綜合征或 AHPNS），它在 2011 年 6 月，由來自亞利桑那大學(xué)的 D.V.萊特納（未發(fā)表），在一個由越南動物衛(wèi)生廳在河內(nèi)組織的研討會上提出。隨后，于 2012 年 1-2 月，它被全球水產(chǎn)養(yǎng)殖倡導(dǎo)雜志定義為早期死亡綜合癥（EMS）。后來在同一年，亞太地區(qū)的水產(chǎn)養(yǎng)殖中心（NACA）編寫了一個病證并在其網(wǎng)站上提供（www.enaca.org）。最后，該病原體（即單獨(dú)的副溶血性弧菌）被發(fā)現(xiàn)于 2013 年。此病獨(dú)特的診斷特點(diǎn)是蝦肝胰腺中內(nèi)側(cè)脫落許多小管上皮細(xì)胞，目前把它作為來源于蝦胃的致病菌的一個未知結(jié)果毒素（s）。目前確診仍依賴于 HP 細(xì)胞的大量脫落的組織學(xué)診斷，數(shù)百蝦涉嫌 AHPND 感染，主要做頭胸部組織切片觀察，且主要專注于蝦的肝胰腺。在此工作的過程中，各種其他肝胰腺病原體有也遇到并記錄，但不經(jīng)常報(bào)道。這里發(fā)現(xiàn)了一個日益流行的異常現(xiàn)象，在斑節(jié)對蝦和南美白對蝦的肝胰腺、胃和腸道的連接處的小管內(nèi)發(fā)現(xiàn)了蠕蟲狀體，表面看起來像簇蟲。它們有時會產(chǎn)生大量的白色的糞便，這種現(xiàn)象稱為白色糞便綜合征（WFS），池塘養(yǎng)蝦大約養(yǎng)到 2 個月開始發(fā)生，他們最初認(rèn)為是簇蟲導(dǎo)致的白便[2]。據(jù)估計(jì)，2010 年 WFS 對泰國的損失為 10％-15％，主要降低蝦的存活率和蝦的規(guī)格，且這一估算排除了每年由白斑病給泰國造成的正常損失。在這里，我們用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡對蠕蟲狀體進(jìn)行了詳細(xì)研究，表明它們不獨(dú)立的有機(jī)體，而是是編隊(duì)組成的集合。微絨毛轉(zhuǎn)化（ATM）是蝦肝胰腺小管上皮細(xì)胞從上面脫落，之后它們聚集在肝胰腺和腸道相接的地方，之后通過腸糞便排出。 

A 浮便 B 食盤里的糞便 C 白腸 D 金棕色腸道 E 糞便的顯微照片

    a 低倍鏡下顯示有 3 個蠕蟲狀體，其中 1 個在小管內(nèi) b 高倍鏡下可見蠕蟲狀體內(nèi)有 B細(xì)胞 c 用孟加拉紅給蠕蟲狀體染色，在高倍鏡下觀察其內(nèi)部膜結(jié)構(gòu)。

肝胰腺組織涂片染色，HE 染色揭示 ATM。顯微照片清楚地顯示蠕蟲狀形態(tài)，ATM 內(nèi)部或游離的囊腫樣的內(nèi)容。

結(jié)果：

A 細(xì)小碎片 B 早期聚合 C 中期聚合 D 壓縮 E 在腸道附近聚集 F 腸道內(nèi)真實(shí)的族蟲，細(xì)胞核突出

蝦的肝胰腺 HP 組織切片甲苯胺藍(lán)染色。（a）一個 HP 小管的遠(yuǎn)端末端截面顯示在隱窩上有密集的染色顆粒，由細(xì)管管腔微絨毛在轉(zhuǎn)化 ATM 時形成。注意微絨毛層所有的細(xì)胞是完整的。 （b）HP 小管處脫落，微絨毛正在轉(zhuǎn)化中。 （c）一個 B-細(xì)胞從 HP 小管上脫落，有正常和正在轉(zhuǎn)化的微絨毛，還有一個在裂解的細(xì)胞 （d）在高放大倍率下的蠕蟲狀體 ATM，有些包裹 B-細(xì)胞，在 ATM 周圍有很多碎片。

透射電鏡 ATM：左邊有包含的 B 細(xì)胞，單層的封閉膜，里面有脫落聚合的微絨毛復(fù)合物。

TEM（投射電鏡）的微絨毛轉(zhuǎn)化和脫落的步驟。 （a）HP 小管上皮細(xì)胞的低倍率顯示正常和轉(zhuǎn)化的微絨毛和兩個脫落細(xì)胞的裂解。表明早期是由一層膜包圍的。（b）低倍率下，部分微絨毛脫落，細(xì)胞裂解前的情況和未脫落的 B 細(xì)胞 （c）高倍率下，清楚地顯示出正常和轉(zhuǎn)化、脫落的微絨毛之間的不同。 （d）高倍率下 HP 小管上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和脫落。
TEM（投射電鏡）在 HP 小管隱窩中不尋常的電子致密顆粒。（A）低倍率下，HP 小管內(nèi)可變形的不知名的電子致密顆粒（B）高倍率下，上皮微絨毛上有一個顆粒，可能是之前進(jìn)入的細(xì)胞。 （C）高倍率下，微絨毛上皮細(xì)胞里面有電子致密顆粒，它旁邊鄰近的微絨毛表層細(xì)胞的形狀發(fā)生了變化 （D）低倍鏡下，一個小管上皮細(xì)胞內(nèi)有很多電子致密顆粒，其絨毛在轉(zhuǎn)化的前期。

    討論： 
    在我們用電鏡揭示 ATM 的起源以前，我們用光鏡發(fā)現(xiàn)其跟簇蟲相似。那時一個關(guān)于簇蟲的文獻(xiàn)表明，在蝦中還從來沒報(bào)道過簇蟲，當(dāng)然也包括泰國發(fā)表的那篇與簇蟲很相似的 ATM。具體來說，它們?nèi)狈�動力，并沒有表現(xiàn)出細(xì)胞器，如通常突出的原子核。從后續(xù)電子顯微鏡的結(jié)果確認(rèn)：ATM 沒有細(xì)胞核和簇蟲常有的超微結(jié)構(gòu)（例如，復(fù)雜的膜結(jié)構(gòu)，線粒體，核糖體等）。但是，我們發(fā)現(xiàn)了一個同約翰遜以前的研究相似的現(xiàn)象。她在螃蟹的肝胰腺小管中偶爾會發(fā)現(xiàn)透明的薄膜狀的物質(zhì)，她認(rèn)為這個物質(zhì)是從微絨毛上皮產(chǎn)生的。但她沒有給出它們形成的細(xì)節(jié)，并表示無法解釋它們的功能或意義，無法斷定它們是否的一個正常的過程或是結(jié)果某種罕見的病理。我們蝦的 ATM 形態(tài)特征與約翰遜螃蟹中的不明物質(zhì)很相似，特別是投射電鏡圖。我們在其它甲殼動物的公開刊物中沒找到類似的物質(zhì)。當(dāng) ATM 的發(fā)生嚴(yán)重時，它可以導(dǎo)致蝦形成白色糞便，如果很多同池的蝦同時表現(xiàn)出這種現(xiàn)象，它可以導(dǎo)致浮便，有時會漂浮堆積（即白糞便綜合征或 WFS）。它通常出現(xiàn)在蝦養(yǎng)殖 2 個月的時候，并可能伴有較高的死亡率。然而，ATM 有時與蝦的肝胰腺疾病如 AHPND、弧菌病及對蝦腸微孢子蟲一起出現(xiàn)。導(dǎo)致的結(jié)果是，在越南 WFS 被認(rèn)為是對蝦腸微孢子蟲導(dǎo)致的[17]。但這隨后在泰國的自然感染和實(shí)驗(yàn)室研究實(shí)驗(yàn)中表明不太可能是孢子蟲導(dǎo)致的[18]。因此，可以肯定的是，嚴(yán)重的 WFS 是大規(guī)模形成 ATM 導(dǎo)致的。然而，ATM 形成的原因仍然是個謎，希望更多人能夠去研究它的特性和形成機(jī)制。總的來說，我們的工作表明，ATM 是由小管上皮細(xì)胞脫落，裂解，導(dǎo)致微絨毛轉(zhuǎn)化而形成的。這表明 ATM 的形成是一種病理過程。事實(shí)上，現(xiàn)在通過活蝦的HP 組織涂片，很容易就發(fā)現(xiàn)了它。以前 ATM 在蝦中沒有發(fā)現(xiàn)，可能是流行率比較低的原因，正如先前約翰遜報(bào)道螃蟹也一樣。然而，它們在亞洲流行越來越嚴(yán)重，就不能忽視這個問題了。明顯的是 ATM 的流行于 AHPND 暴發(fā)流行有關(guān)系。雖然這可能有一定的因果關(guān)系，但同時也出現(xiàn)了肝胰腺的微孢子蟲和 AHPND 一起流行的情況，但現(xiàn)在我們知道，當(dāng) AHPND 沒有感染細(xì)菌時，微孢子蟲與 ATM 的因果關(guān)系的可能性不大 [1]。而親蝦和仔蝦的感染會導(dǎo)致微孢子蟲和 AHPND 細(xì)菌增加蝦的發(fā)病率。這個觀點(diǎn)可以找到一點(diǎn)依據(jù)，泰國一些蝦農(nóng)收到同一批 S P F 仔蝦，但它們或多或少在同一時間暴發(fā)了 AHPND。我們的研究也可以說明，一些地方性的微孢子蟲可以在南美白對蝦親蝦和仔蝦時感染，這應(yīng)該是來源于美國，但卻從未報(bào)道過 。 

    總之以前的信息表明，蝦孵化場的生物安全措施沒有做到位，像外來的和當(dāng)?shù)氐牟≡�體都沒排除干凈。因此，對于 ATM，我們必須考慮兩個可能性。無論它們感染了類似 AHPND 和微孢子蟲時，或它們感染了多種病原體但交替的表現(xiàn)不同病源病癥。例如，已經(jīng)報(bào)道，AHPND細(xì)菌產(chǎn)生一種強(qiáng)效的毒素能引起肝胰腺小管上皮細(xì)胞脫落[1]。在沒有細(xì)胞脫落時，低劑量的毒素能否導(dǎo)致 ATM？為了測試這后一種可能性，實(shí)驗(yàn)室用病原體細(xì)菌的稀釋毒素建立了感染模型 [1]。當(dāng)出現(xiàn)新的病原體時，不管蝦中有或沒有 ATM]時 ，對其基因組進(jìn)行對比分析是比較有效的。或者，電子致密顆粒與微絨毛的轉(zhuǎn)化有有關(guān)的，這個可以作為一個研究方向。比如，可以用物理手段將它們分離出來。通過組織勻漿，差速離心和過濾，之后對它進(jìn)一步分析。最后，我們通過透射電鏡發(fā)現(xiàn)，ATM 的表面結(jié)構(gòu)跟簇蟲很像。現(xiàn)在在亞洲養(yǎng)殖的蝦的肝胰腺體內(nèi)常發(fā)現(xiàn)不是獨(dú)立有機(jī)體的物質(zhì)。它是由 HP 小管的上皮細(xì)胞的脫落和聚合，微絨毛轉(zhuǎn)化時形成的。裸露的上皮細(xì)胞隨后裂解，表明該過程對蝦的生長和存活有負(fù)面影響。嚴(yán)重時可導(dǎo)致白便綜合癥（WFS）。需要進(jìn)一步研究 ATM 產(chǎn)生的原因，并評估其對蝦養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)的影響。 

特別鳴謝中國水產(chǎn)論壇網(wǎng)友“南海漁醫(yī)”提供文獻(xiàn)線索，感謝網(wǎng)友“songxuebai”提供中文內(nèi)容！